植物激素检测


植物内源激素检测钟鼎QQ技术支持


        植物激素(Plant hormones)是植物体内天然存在的一系列有机化合物,其含量非常低,调控植物生命活动的整个进程。

        卡文思在植物激素检测方向深耕多年,有非常成熟的检测经验和流畅的SOP(标准作业程序)。采用液质联用系统,内标法与外标法相结合,精确、高效的检测激素含量,满足不同客户的需求。目前检测数据库已扩展到11大类39种指标,并仍在积极研发扩项。如果您想尝试新方法或检测新指标,我们也可以为您开发样品前处理方式,建立检测方案。

植物内源激素检测

一、客户署名公司名称发表的文章

1、Rice OsBT1 regulates seed dormancy through the glycometabolism pathway.Plant Physiology and Biochemistry 151(2020)469-476.doi:10.1016/j.plaphy.2020.03.055

2、BR deficiency causes increased sensitivity to drought and yield penalty in cotton.BMC Plant Biol. 2019 May 28;19(1):220. doi: 10.1186/s12870-019-1832-9.

3、Downregulation of Nuclear Protein H2B Induces Salicylic Acid Mediated Defense Against PVX Infection in Nicotiana benthamiana.Front. Microbiol. 10:1000. doi: 10.3389/fmicb.2019.01000

4、A substitution mutation in OsPELOTA confers bacterial blight resistance by activating the salicylic acid pathway.Journal of Integrative Plant Biology,2018,60(2):160-172.DOI:10.1111/jipb.12613

5、Melatonin Induces Parthenocarpy by Regulating Genes in Gibberellin Pathways of 'Starkrimson' Pear (Pyrus communis L.). FRONTIERS IN PLANT SCIENCE. 9: 946, DOI: 10.3389/fpls.2018.00946

6、NO is involved in JA- and H2O2-mediated ALA-induced oxidative stress tolerance at low temperatures in tomato.Environmental and Experimental Botany Pub Date : 2018-10-22 , DOI: 10.1016/j.envexpbot.2018.10.020

7、Cuicui You, et al (2016). Effect of removing superior spikelets on grain filling of inferior spikelets in rice. Fronteris in Plant Science 2016-7-1161 doi: 10.3389.



二、激素类别钟鼎QQ技术支持


生长素(Auxin)脱落酸(Abscisic acid, ABA)细胞分裂素(Cytokinins, CKs)
水杨酸(Salicy acid, SA)茉莉酸(Jasmonates, JA)赤霉素(Gibberellines, GAs)
独脚金内酯(Strigolactones,SLs)油菜素内酯(Brassinasteroids, BRs)植物乙烯(Ethylene, ETH)
磺肽素(Phytosulfokine,PSK)褪黑素(Melatonin,MT)



三、检测方法

        ①外标法:用待测组分的纯品作对照物质,以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法。         ②内标法:在样品处理前,将一定量与待测组分在结构性质相近的待测物质(通常为同位素标记的同类别物质)加入样品及标准品中,根据内标在样品基质及标品中的响应值之比来校正待测物含量。

内标法好还是外标法好



四、样品前处理

        样品前处理的工作是我们的强项,规范化操作程序,流水化作业,最大程度保持不同样品的均一化。我们使用创新的第三代前处理方法,安全无毒、环保卫生,快速有效,回收率稳定且大于85%。

样品前处理



五、检测仪器

        · 安捷伦 A1290 高效液相色谱串联 AB Sciex QTRAP® 6500质谱,可有效同时对多种物质进行高精度的检测。

        1、QTRAP 6500 LC-MS/MS 系统是目前非常灵敏的质谱系统,可以在同一台质谱上提供高灵敏度的定量分析数据和定性分 析数据。它将串联四极杆的扫描方式和线性离子阱的扫描方式完美地结合在一起,是极佳质谱分析平台。

        2、MRM 扫描模式下有普通三重四级杆质谱10倍以上的灵敏度,灵敏度可达10-9g以上,部分物质灵敏度可达 fg 级。

        3、MRM 通道数量:一次进样,不分时间段,可同时检测>1000个 MRM 离子对,并保证灵敏度和重现性不受损失。高达12,000 Da/sec 的扫描速度充分发挥UHPLC的性能,每个超快速液相色谱峰可获得更多的数据点。

        4、正负切换时间:≦20 ms,且保证多个正化合物和多个负化合物同时分析时,灵敏度和重现性不受明显损失。

液质联用系统

液质联用系统



六、质控说明

        (1) 进样前会先跑标准品,每个点进两针,保证重复性没有问题后才会跑样品。
        (2) 上样时每十个样进一个质控样(标样),一般进中间浓度的质控样,与原来的峰面积进行比较,如果峰面积偏差不超过10%则判断稳定性合格。



七、案例分析

(一)丁艳峰教授研究团队检测TZR、IAA、ABA的案例(Effect of removing superior spikelets on grain filling of inferior spikelets in rice) :上小穗的去除对水稻下小穗籽粒灌浆的影响

        研究人员发现水稻经常无法达到其产量潜力往往因为下部小穗的籽粒灌浆不良,在这项研究中,研究人员试图确定大穗的下部籽粒灌浆是否受到上部小穗及其生理机制的限制。在开花期去除上部小穗以试图迫使光合产物转运至下部小穗。通过测量了上部小穗去除对籽粒灌浆期间籽粒结实率,粒重,籽粒灌浆速率,蔗糖含量,激素水平,关键酶活性以及蔗糖参与淀粉代谢的基因表达的影响。

        去除上部小穗后,上部小穗的顶端优势被释放,导致下部小穗中的激素水平(TZR,IAA和ABA)增加;这有助于扩大上部小穗吸收容量和蔗糖供应。同时,在此处理下,淀粉合成中关键酶的表达和活性也升高,从而进一步改善了下部小穗籽粒灌浆,这表明通过提高激素水平可以实现上部小穗谷粒填充的改善,此项研究为提高水稻产量提供了新的思路。

上小穗的去除对水稻下小穗籽粒灌浆的影响

        图注:水稻籽粒灌浆期间上部小穗(SS)和下部小穗(IS)的激素含量(TZR,IAA和ABA).T0和T2代表没有任何处理的对照组,并且去除了前2/3的小穗。垂直条表示平均值±SE(n = 3);实验显示上部小穗去除处理显著增加了WJ165中的下部小穗激素水平,并且提前5天达到峰值。


(二)陈剑平院士团队检测水杨酸指标的案例(DownreguI at ion of Nuc I ear Protein H28 Induces SaIicyIic Acid Defense Against PVX Infection in Nicotiana benthamiana): 核蛋白H2B的下调诱导水杨酸介导的对PVX感染的防御

        研究人员猜想组蛋白H2B与植物激素水杨酸SA的产生和积累有关,并影响植物对植物病毒的免疫应答。通过基因沉默的方法调整烟草中组蛋白H2B的表达,并做了对照实验研究H2B沉默对植物体内SA含量及其途径的影响,以及对植物的免疫应答的影响。结果显示H2B沉默导致烟草内源性SA的增加,并诱导了植物的坏死症状,坏死是过敏反应(HR)的标志,其作用是抵抗植物中的病毒感染,这一结果证明了组蛋白H2B影响植物体内激素SA的产生和积累,并以此间接影响了植物对植物病毒的免疫功能。


水杨酸(SA)在H2B沉默植物中积累,参与叶柄坏死

图注:水杨酸(SA)在H2B沉默植物中积累,参与叶柄坏死。


(三)万建民院士研究团队检测 ABA GA的案例(Rice OsBT1 regu I ates seed dormancy through the glycometabolism pathway): 水稻OsBT1通过糖代谢途径调节种子休眠

        研究人员从所在实验室提供的N22突变体库中,鉴定到一个休眠性减弱的突变体h470。 对发芽率进行测定,发现在抽穗后28天,h470开始萌发,此时野生型仍具有很强的休眠水平。 而在贮藏期,h470种子的发芽率始终高千N22, 休眠性有了明显的 降低。 其内源的 ABA含量增加,GA4含量也明显升高,表明h470弱休眠表型井不受GA或ABA通路的调控。 通过mut-map、转基因互补和RNAi干扰实验,确认OsBT1的突变是h470弱休眠表型的原因。 进一步代谢组的分析表明,OsBT1参与糖代谢生理过程,影响总淀粉、 可溶性糖和葡萄糖含量, 进而影响水稻种子的休眠。

h470基因的Ill.It-map分析及转基因和等位突变体材料的种子休眠水平鉴定。

图注:h470基因的Ill.It-map分析及转基因和等位突变体材料的种子休眠水平鉴定。



八、植物激素检测常见问题解答

1、报告中包含哪些数据?
        我们最终会给您提供一份PDF版本报告及可编辑的Excel格式数据。报告中包含实验原理与设计,试剂耗材,实验仪器,实验步骤,实验结果等内容,包含标曲图及检测样品的总离子流图。数据包含原始检测浓度及激素含量。如果对质谱图有需求,可联系我司客服人员单独获取。

2、液质联用检测方法用的是什么设备,灵敏度如何?
        卡文思检测采用高效液相色谱+串联质谱法(即液质联用)。检测仪器为Agilent 1290高效液相色谱仪与AB SCIEX Qtrap 6500+质谱仪串联。是目前较为灵敏的液质联用系统。可以精确、高效的检测植物样品中的内源激素含量。一般激素线性可达到pg级别。
        HPLC-MS/MS,依托二级质谱,可以得到更多结构信息,减少假阳性结果,同时将液相色谱高效的在线分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力相结合,弥补了传统液相检测器的不足,可以同时得到化合物的保留时间、分子量及特征结构碎片等丰富的信息,是复杂样品和微量/痕量样品分离分析最有力的研究手段。

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九、公司介绍

1、资质齐全

2019年,实验室取得了中国检验检测机构资质认定CMA证书, 可向社会出具具有证明作用的数据和结果, 具有法律效力。同年,实验室参加的标准样品研究所组织的2019年度 IERM T19-33 土壤中重金属检测能力验证项目, 砷、汞指标通过验证。

公司资质

2、仪器先进

卡文思以服务农业为主,业务涉及农产品、土壤、水质、食品安全等多个领域。 仪器设备涵盖电子光学、质谱、光谱、色谱、生化分离分析、样品前处理和制备。 可为科研工作者提供优质的理化分析, 靶向代谢产物检测等服务。 也可为农食企业在社会贵任、环境友好、产品质量、生产规范质量体系等方面提供服务。

ICP Waters 安捷伦A1290


3、员工展示

卡文思检测不断引进高新技术人才,为企业创新增加新鲜血液。同时不断优化检测方法,规范工作流程,在保证质量的前提下,提高工作效率,让科研工作者以更快的速度,得到更确证的数据。创享企业信誉,传递行业价值。

员工合影